Каковы оптические свойства флуоресцентных полосовых фильтров?
Центральная длина волны (CWL): длина волны, при которой фильтр имеет наибольший коэффициент пропускания, который должен соответствовать пику эмиссии флуоресцентного красителя (например, FITC: ~525 нм, DAPI: ~460 нм).
Полная ширина на половине максимума (FWHM): диапазон длин волн, в котором пропускание составляет ≥50%, обычно узкополосный (10~40 нм) или широкополосный (50~100 нм).
Пиковое пропускание (Tpeak): обычно >90% (до 95% и более для высококачественных фильтров).
Глубина среза: оптическая плотность (OD) в непропускающей области (например, в полосе возбуждения) должна быть ≥ OD4 (т. е. пропускание < 0,01%).
Параметр
|
Типичное значение
|
Влияние
|
CWL
|
Выбор на основе флуоресцентного красителя (например, Cy5: ~670 нм)
|
Она должна совпадать с пиком эмиссии флуоресценции, иначе сигнал будет потерян.
|
FWHM
|
10~40 нм (узкая полоса)
|
Чем уже полоса пропускания, тем выше отношение сигнал/шум, но сила сигнала может снизиться.
|
Диапазон отсечки
|
OD4~OD6 (полоса возбуждающего света)
|
Обеспечьте полное блокирование возбуждающего света (например, лазера 488 нм), чтобы избежать фоновых помех.
|
AOI
|
0° (оптимальное вертикальное падение)
|
Наклонное падение может привести к смещению КСВ (требуется выбор конструкции с угловой компенсацией).
|